DebRA组织分发（2008-2-22），原文未公开

翻译：周迎春初次翻译：2008年5月。最后更新:2012/12/30。

导言

• 本文概述了国际DebRA项目组合中当前和近期完成的一些研究。

• 除非另有说明，这里提到的研究由英国DebRA代表国际DebRA资助和管理。

• 所有此类研究经历了严格的同行审查申请过程 ，由国际DebRA的医学和科学顾问团（MSAP）实施，其成员是资深的EB研究人员和临床医师。

• 组合中的所有研究项目和项目群被要求给DebRA做深入的年度进展和项目结束报告，以证明得到了令人满意的进展，从而争取全额资助。

1、DebRA当前研究的优先次序

2000-2006年期间DebRA优先考虑四个方面的研究资金：

• 遗传学/基因治疗

• 癌症

• 伤口愈合

• 临床

2、目前的研究组合

在表1的当前研究组合中的各项目均是正在进行的或最近完成的，根据优先级排列。当一个项目的主要目标是开发一种特定的疗法时，在“优先领域”一列表示。

• 遗传学（ 18个项目）

• 癌症（ 6个项目）

• 伤口愈合（ 1个项目）

• 临床（ 7个项目）

3、研究项目群

除了一直在支持约30到35个研究项目以外，DebRA还支持一些项目群，这些是长期项目，通常涉及到多个合作实验室的专家库。

3.1、在FP6[欧盟第六期框架研究计划]的资助下，DebRA参与了两个大型欧盟合作项目：治疗皮肤（图卢兹的霍夫纳尼安[Hovnanian]领导）和皮肤治疗（尼斯的梅内古齐[Meneguzzi]领导）。这两个项目都旨在解答RDEB候选疗法在临床试验前 的许多安全和疗效问题，例如：

• 载体开发--安全，有效的载体

• 全身性传送，和组织定向

• 载体和基因引起的免疫反应

• 细胞培养和皮肤移植技术

• 细胞/移植的长期效力

• 移植的致癌性

载体的设计已经做过多次改进，通过了实验室的测试，现正应用于动物实验。

 3.2、DebRA资助了一个为期5年的项目群，“EBS的RNA疗法”（麦克林[McLean]和雷恩[Lane]，敦堤[Dundee]）。在开发关掉EBS患者的错误角蛋白基因和开发‘替代’角蛋白基因方面已取得了重大进展。一种可能治愈携带角蛋白14突变的EBS患者的疗法目前已经在实验室里的皮肤细胞上测试成功，正在进行动物实验。这个小组已经在考虑开发一种方案，能通过细胞移植把基因转送到患者身上。

3.3、DebRA资助了一个为期5年的癌症项目群“RDEB患者中的SCC”（由李·邓迪[I Leigh Dundee]领导，与巴斯与伦敦，皇家，盖伊与圣托马斯医院[London Hospitals Barts, Royal, St Thomas, Guy’s]合作）。这些项目从遗传学方面研究皮肤癌，寻找潜在的包括基因疗法在内的治疗方法，并创建了非常有用的网络。这个小组还拥有一个鳞状细胞癌组织库， 李还是DebRA皮肤癌专家组的主席。

4、具体研究领域的进展

下面概述在关键领域的进展，国际DebRA资助的项目的首席研究员和地点用黑体字表示。虽然项目资助是基于现有的DebRA优先级，但一些新的领域显示出希望，我们可能考虑将来提供资助（如细胞疗法，包括骨髓移植及其他干细胞、小分子疗法）。

4.1、基础研究（遗传学和EB的生物学）

过去15-20年来在确定各种EB亚型的基因类型方面的进展使我们已经辨明了大约10种致病基因。这些基因编码皮肤蛋白：角蛋白14和5，网蛋白（EBS） ， VII型胶原（RDEB和DDEB），层粘连蛋白、整合素和XVII型胶原（JEB）。

但是，仍有一些EB的基因缺陷还没有确认。很可能对多数EB来说，在治疗之前必须先有准确的分子诊断。因此，DebRA继续资助很多EB的基因、分子和细胞生物学方面的基础研究。例如：大约20%的EBS病例找不到基因突变，一个由麦克林（敦堤）领导的项目正在寻找相应的基因和突变，可能这项研究也能产生新的疗法；的确最近刚发现了针对一个新突变的新方法。其他项目研究EBS的生物学基础，揭示特定EBS突变的效果，由麦金[Magin]（波恩）和维歇[Wiche]（维也纳）负责。

只知道哪个基因有错是不够的--每个基因可能有几百个突变，已经知道不同的突变对编码后蛋白的效果是不同的，因此也影响到EB病情的特征和严重程度。突变的性质也影响到疾病是显性遗传还是隐性遗传。麦格拉思[McGrath]（伦敦）在研究EB不同突变的基因型（人的基因结构）如何影响表现型（引起的身体表现）；直接导致EB的突变基因之外的其它基因的不同也会影响到病情的严重程度。

即使已经准确知道了基因缺陷，在能通过基因疗法使用一份正确的基因之前还需要很多额外的信息：基因的活性必须严格控制，以在合适的位置、在正确的时间、产生正确数量的蛋白质。许多 旨在开发基因疗法的项目（包括欧盟框架项目群资助的治疗皮肤和皮肤治疗，DebRA参与）必须进行大量的前临床研究，了解他们提出的疗法如何影响基因功能。

许多项目希望用人类EB的动物模型来更好的理解EB。有些实验动物，主要是老鼠和一些狗，自发产生了突变（即自然形成的动物EB），有些是培养出来的，某 些甚至携带人类的EB基因。 这些动物模型也可以用来测试可能的疗法：实际上这经常是一项法律要求，只有在小动物（经常还是大动物）身上证明有效的疗法才被批准进行人体临床实验。一个 困难是很多携带EB基因的 模型动物病情很严重（像人一样），无法长期存活：有几项DebRA资助的项目已经开始定向于开发症状不那么严重能存活较久的人类EB动物模型。对某些EB 亚型开发出来的一种模型是“条件”模型：动物相当健康，但是可以通过化学方法在一小块皮肤上激活EB基因。这种方法有几个优点--研究人员可以在生存较久 的小鼠身上研究EB（或疗法），由于除了一小块皮肤之外大部分是未感染的，动物的福利也更好。

4.2、EB疗法的开发（基因，细胞，蛋白质和小分子疗法）

4.2.1、基因疗法

2006年 见证了对一种EB的基因疗法的‘原理证明’。通过试图纠正错误的基因，基因疗法针对EB的根本原因--本例中对non-Herlitz交界型 EB（JEB）（见表1）。这一激动人心的工作在2006年10月爱尔兰DebRA和英国DebRA联合组织的都柏林国际EB研究大会上汇报。（也有很多 其他EB研究领域的进展--伤口愈合，皮肤癌，营养和骨健康。）

不过，通过皮肤移植进行的基因疗法只是正在开发的几种方法之一。移植只能治好这一小块儿皮肤上的基因缺陷。理论上说，全身性的疗法应该更好。

基因疗法还可以使用‘载体’--在实验室里修改过从而对人体无害，但可以把需要的基因（比如胶原蛋白基因）带到人体细胞中的病毒（有时也称为‘载体疗法’。两个重要的欧盟框架计划资助项目治疗皮肤和皮肤治疗都用这种方法开发RDEB的基因疗法。在实验室模型中已经成功的纠正了RDEB，但是在精确控制足够的正确基因表达和载体的稳定度上还有技术困难。这两个项目都需要继续优化载体并证明疗效、安全性和稳定性。由于一种治疗儿童SCID（重症联合免疫缺陷，俗称‘泡沫孩子’）的无关基因疗法造成了白血病，欧洲监管当局目前对所有的基因疗法都非常谨慎。

4.2.2、细胞和蛋白质疗法

‘细胞疗法’是另一种可行的全身性疗法，有几个研究小组正在开发。从某种意义上说，细胞疗法是移植疗法的延伸，不同之处在于细胞以自己的方式到需要的地方，因此有潜力治疗全身。细胞疗法可以直接把细胞注射到伤口，或静脉 注射。静脉注射时细胞通过血液系统循环全身，可以移动到并修复全身的多处伤口。

到目前为止，这项由日本、美国和欧洲多个小组进行的工作主要在人体RDEB的小鼠模型上进行，取得了一些进展：基因校正过的细胞找到了通向伤口部位的路， 产生了胶原蛋白并加强了皮肤。这种‘细胞疗法’（甚至‘蛋白疗法’，正确的VII型胶原蛋白以类似的方法或者直接注射到伤处或者注射到血液中）仍需要很多 深入的临床前和安全性研究，然后才能开始人体治疗。

细胞疗法也可以使用没有患EB的捐助者的细胞，此时细胞中的基因本身就是好的。当然，施主必须与患者免疫匹配，像所有器官移植一样，这样细胞才不会被患者的身体当成异物产生排斥。然而，一项突出的DebRA研究最近刚刚完成（麦格拉斯，伦敦），把健康施主的皮肤纤维原细胞注射到RDEB患者的皮肤中。尽管由于免疫不匹配移植的纤维原细胞没有生存超过两个星期，但好像他们有某种提高患者自体细胞产生错误胶原的能力，这已经足以把皮肤‘粘’在一起了，这种效果持续了3个月以上。

即使皮肤细胞是免疫匹配的，如果不是干细胞，他们也不能永远存活。多数当前的移植方法设法保证用尽可能多的皮肤干细胞生成皮片。一个近期资助的DebRA项目（麦格拉斯，伦敦）开始研究把胚胎干细胞用在EB的再生性疗法中的可行性。

4.2.3、骨髓和干细胞疗法

有几个研究小组还试图用骨髓细胞进行治疗RDEB小鼠的细胞疗法试验。使用骨髓细胞的一个好处是他们可以根据身体的需要分化成各种不同的细胞，这就是为什么骨髓可以治疗白血病（生成新的血细胞）或心脏病发作后帮助修复心脏（生成新的心肌细胞）。另一个好处是骨髓分化出来的细胞仍然是‘干细胞’，能无限制的自我复制。因此骨髓细胞可以用来开发一种长效的、可再生的新皮肤细胞的‘干细胞’源。

（最近，媒体报道了一个美国的RDEB患儿接受了来自健康弟弟的骨髓移植。对一个患病的小孩儿来说骨髓移植是一种危险的手术，这个小孩儿的EB是否能治好（或短期或长期）还有待观察。）

DebRA现在有一个项目，已经通过同行审查批准了贷款，希望研究骨髓移植治疗EB的可行性。可惜国际DebRA目前没有足够的资金支持这一项目。

4.2.4、关闭显性遗传的EB

在显性遗传（DDEB，EBS）的EB患者身上，存在能压制正确基因的错误基因拷贝，因此表现出患病。

必须使错误的拷贝失效。麦克林（敦堤）正 在开发一种针对EBS的技术，使用短RNA片段，称为小分子干扰RNA（siRNA）。很重要的一点是它只对错误的角蛋白信息起作用，而不影响正确的角蛋 白生成，也不影响维持细胞正常功能需要的几千种其它蛋白质的生成。目前的进展正使设计具有这种性质的siRNA成为可能，为后续的研究做基础。

都柏林三一学院的一个研究组（爱尔兰DebRA资助）在研究针对DDEB的错误基因的同种技术。

4.2.5、小分子疗法

目前DebRA资助的小分子疗法绝大多数集中在关闭显性基因 的技术（见上文），或可能的癌症疗法（见下文）。不过有越来越多的证据表明小分子可能在调增或调减基因的表达上有广泛的作用，可用于开启或关闭其他能补偿 引起EB的基因功能缺失或不足的基因。这将产生新的治疗领域--更侧重以药物的方式来治疗EB。

4.3、RDEB的皮肤癌

皮肤癌项目试图找到使有严重慢性溃疡的人，尤其是RDEB患者，患鳞状细胞癌（SCC）的原因。看起来与正常皮肤上的癌症相比这些癌通常更活跃更容易扩散。预防或减缓RDEB皮肤癌扩散的关键在于理解癌症形成的基本细胞过程，以及这一过程在EB和正常皮肤上有什么不同。

发生癌症时，几十种甚至几百种蛋白质和其它分子之间复杂的相互作用或‘细胞信号’变的不平衡，因此正常的细胞生长和死亡过程被打乱，细胞因此癌变。已经知 道与EB有关的蛋白质，比如胶原蛋白（RDEB）和整合素（JEB），对细胞信号和癌症的发展也有重要作用。DebRA资助了马歇尔[Marshall]（伦敦）领导的多个项目，得到了很多在细胞相互作用方面有用的信息，同时在开发几种潜在的针对目标癌症的小分子疗法。DebRA也资助了盖诺克斯[Gagnoux]（尼斯）领导的一个项目，研究一些已知在RDEB患者身上帮助皮肤细胞扩散和侵入周边组织的酶蛋白的作用。这个项目基于此前卡哈里[Kahari]（芬兰）的研究相关酶的项目。

有几个DebRA资助的项目试图理解几种基因和细胞成分的作用，以及干预它们的行为能否产生抗击癌症的候选小分子疗法。有两个项目在研究VII型胶原中的 一段（称为NC1）在鳞状细胞癌发展中的作用。此前斯坦福大学的研究人员发表的结果显示在小鼠身上NC1对鳞状细胞癌的形成很关键。这个结果与DebRA 资助的伦敦和敦堤研究组（癌症项目群的一部分）的临床研究结果矛盾，后者显示：VII型胶原越少，EB的症状越重，患癌症的危险越高。这种明显的不同可能是由于斯坦福大学的小鼠模型的背景基因中含有Ras基因，在癌症的形成中起了作用。癌症项目群的实验室正在详细检查VII型胶原中的NC1。

爱尔兰DebRA正在资助一项由马林科夫[Marinkovich]（斯坦福大学，美国）领导的项目，希望进一步澄清NC1的作用，并开发小分子疗法。

爱尔兰DebRA还资助了一项由奥图尔[O'Toole]（伦敦）率领的项目，研究Axl蛋白的作用，在EB患者的患鳞状细胞癌中，特别是恶性的肿瘤中，它的含量显著升高。确认Axl作用和研究对其进行干预如何影响癌症的工作正在进行。

4.4、RDEB的创面愈合

伤口愈合是一个重要的研究领域，鳞状细胞癌总是在长期有严重伤口的地方发生。任何能够使伤口更快愈合或减少伤口蔓延的方法都可能减少皮肤癌的风险，对感染，贫血，营养不良，疤痕引起的行动不便和残疾，疼痛等也有好处。在专门研究促进愈合的项目（麦克林，敦堤）之外，进一步的研究是通过更好的皮肤护理避免创伤（参看下面的临床研究）。

4.5临床研究

DebRA资助了大量的临床研究项目，其中大部分着眼于提高生活品质，或降低严重EB亚型的次生风险。项目包括疼痛控制（霍华德[Howard]，伦敦；霍格特[Hoggart]，伯明翰），患者的社会心理困难（林士[Rumsey]，布里斯托尔[Bristol]；颂[Soon]，伦敦），和改进的伤口护理（DebRA资助的英国护理，包括儿童和成人）。DebRA护理承担了很多精心设计的重要临床研究项目，评估和评价新的敷料和绷带，以及用蜂蜜帮助愈合并减少感染。这些项目经常是由护士设计的，她们在设计适当的流程上经验丰富，并能与护理产品的生产厂家合作。